Técnica de May Grünwald Giemsa

A técnica de May Grünwald Giemsa emprégase para a demostración de bacterias ou outros microorganismos en sangue.

Características

O frotis, unha vez seco, fíxase e tínguese mediante colorantes adecuados. Xeralmente, nos laboratorios hematolóxicos empregan colorantes baseados na tinguidura de Romanowsky, baseada nunha combinación de eosina e azul de metileno. Aínda que cada laboratorio emprega a súa receita, os colorantes e os métodos de tinguidura máis empregados son os de Giemsa, Wright e May Grünwald Giemsa.

A técnica de May Grünwald Giemsa baséase na acción complementaria de dous colorantes neutros e na afinidade dos elementos celulares polos colorantes ácidos ou básicos. Estes dous colorantes son May Grünwald e Giemsa, son solubles en alcohol metílico e son, polo tanto, inactivos: é o contacto coa auga o que lles da un poder colorante. Os sales disócianse entón coloreando ácido (eosina) e básico (azul de metileno).

Ocasionalmente utilízase en tecidos incluídos en parafina e cortados a 6 micrómetros.

Reactivos

1. Solución stock de Jenner:
   1. Líquido de Jenner, 1gr
   2. Alcohol metílico, 400cc
2. Solución de traballo de Jenner:
   1. Solución stock de Jenner, 25cc
   2. Auga destilada, 25cc
3. Solución colorante de Giemsa:
   1. Giemsa en po, 1gr
   2. Glicerina, 66cc
   3. Alcohol metílico, 66cc

Mesturar o Giemsa coa glicerina. Metelo na estufa a 60 °C durante 2 horas. Engadir o alcohol e mesturar ben.

1. Solución diferenciadora de resina ó 1%
   1. Resina, 1gr
   2. Alcohol etílico ó 95 %, 100cc
   3. Auga destilada (buffer pH 7):
      1. Solución A
         1. Fosfato dibásico sódico, 9,47 gr
         2. Auga destilada, 1000cc
      2. Solución B
         1. Fosfato monobásico potásico, 9,80 gr
         2. Auga destilada, 1000cc

Para cada 100 ml de auga destilada (buffer pH 7), combinar: 49.6 ml de solución a 50.4 ml de solución b.

Procedemento

1. Desparafinar e hidratar ata a auga destilada.
2. Meter en alcohol metílico, 2 cambios de 5 minutos cada un.
3. Poñer os portaobxectos en solución de traballo de Jenner durante 6 minutos.
4. Aclarar na solución de auga destilada (buffer pH 7).
5. Poñer os portaobxectos en solución de Giemsa 45 minutos.
6. Aclarar rapidamente na solución diferenciadora de resina. Chequear ó microscopio.
7. Aclarar en auga destilada.
8. Deshidratar en alcohol de graduación ascendente.
9. Aclarar en xilol e montar.

Resultados

• Núcleo: azul.
• Citoplasma: rosa a rosa escuro.
• Bacterias: azul palo.

Véxase tamén

Bibliografía

• ARP, ed. (1992). Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP). 

Ligazóns externas

• "May-Grunwald Giemsa Method. (Procedure 67).". Arquivado dende o orixinal o 05 de xullo de 2008. Consultado o 03 de maio de 2009. (en inglés)

• "Tinción de las extensiones de sangre periférica:". Arquivado dende o orixinal o 23 de agosto de 2011. Consultado o 03 de maio de 2009. (en castelán)

• "Grandes acumulacións de cromatina (imaxe)". 29 de outubro de 2007. Archived from the original on 29 de outubro de 2007. Consultado o 28 de agosto de 2018. (en castelán)

• "Chronic Lymphocytic Leukaemia Morphology". Arquivado dende o orixinal o 08 de febreiro de 2009. Consultado o 28 de agosto de 2018. (en inglés)